Sommaire de la page :
- Réservation - Aide à la mise en route et à l’interprétation des résultats
- Réservation en ligne
- Etude des interactions protéine/protéine, protéine/acide nucléique et protéine/lipide par spectroscopie de fluorescence
- Généralités sur la spectroscopie de fluorescence
- Tutoriaux en ligne
- Fournisseurs de cuves et de matériels de fluorescence
- Principales applications de la spectroscopie de fluorescence
- Publications 2006 (travaux réalisés avec le fluorimètre du PAP)

Réservation - Aide à la mise en route et à l’interprétation des résultats :
en panne

L’essence de chaque expérimentation est l’existence d’une quantité observable et la corrélation de cette quantité avec un phénomène d’intérêt. Lorsqu’une molécule absorbe de la lumière (excitation), puis la réémet sous forme de fluorescence (émission), chaque processus ayant lieu pendant ce temps donne lieu à des changements dans les paramètres observables en fluorescence. Ces processus dynamiques incluent la formation de complexes avec le solvant ou les solutés, la réorientation de l’environnement autour du moment dipolaire de l’état excité, la diffusion et les collisions avec des molécules extinctrices de fluorescence. Les caractéristiques spectrales d’une molécule fluorescente ou fluorophore peuvent donc donner beaucoup d’informations sur le comportement de cette macromolécule.

La spectroscopie de fluorescence permet de mesurer :
- le rendement quantique ou nombre de photons émis relativement au nombre de photons absorbés
- le temps de vie de fluorescence ou temps nécessaire au fluorophore pour interagir avec, ou diffuser dans, son environnement
- les spectres d’émission du fluorophore
-· l’anisotropie ou polarisation de fluorescence ou excitation photosélective du fluorophore par la lumière polarisée.

Les fluorophores sont rangés en deux classes : intrinsèques ou extrinsèques. Les fluorophores intrinsèques sont des fluorophores naturels. Dans les protéines ce sont les acides aminés phénylalanine (Phe), tyrosine (Tyr) et tryptophane (Trp). Les membranes n’ont en revanche aucune fluorescence intrinsèque. L’ADN est quant à lui très peu ou pas fluorescent.
Les fluorophores extrinsèques sont des molécules ajoutées à un échantillon qui n’est pas fluorescent ou qui ne possède pas les propriétés spectrales souhaitées. Ces molécules peuvent être de nature hydrophile (solubles en milieu aqueux) ou hydrophobe (lipides: acides gras, phospholipides, stérols...; petites molécules capables de s’échanger entre milieu aqueux et membranaire).
La spectroscopie de fluorescence offre l’avantage d’être sensible (peu de matériel mis en jeu), simple à mettre en oeuvre, et de fournir beaucoup d’informations car la connection entre observations spectrales et caractéristiques moléculaires de l’échantillon est quasi-directe. De plus les mesures de fluorescence sont très sensibles car réalisées par rapport à un fond sombre.