Localisation : IBCP, 7 passage du Vercors, 69007 Lyon
- Détermination des constantes cinétiques et d'affinité
- Détermination des paramètres thermodynamiques
- Pêche au ligand
Brochure Biacore T100 en format .pdf (1,98Mo)
| US8
/ UMS3444 BioSciences Gerland - Lyon Sud |
Plateau
Technique : Production et Analyse des Protéines (PAP) |
|
Service
Biacore T100 |
| Sommaire
de la page : |
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| Réservation - Aide à la conception de protocoles et à la mise en routedu Biacore T100 | |
| Catherine
MOALI |
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| Réservation | |
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| Appareils disponibles sur le Plateau technique : |
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Biacore
T100 (Courtesy of Biacore, part of GE Healthcare) Localisation : IBCP, 7 passage du Vercors, 69007 Lyon - Détermination des constantes cinétiques et d'affinité - Détermination des paramètres thermodynamiques - Pêche au ligand Brochure Biacore T100 en format .pdf (1,98Mo) |
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| Etude des interactions biomoléculaires en temps réel. La technologie Biacore. |
| La technologie BIAcore permet d’étudier les interactions moléculaires en temps réel sans marquage d'un des deux interactants. L'appareil fonctionne sur le principe d'un biocapteur basé sur l'utilisation de la résonance plasmonique de surface qui détecte des variations de masse à la surface d'une sensor chip sur laquelle un des deux interactants est immobilisé. L'autre interactant est injecté en solution dans un flux continu de tampon par une cartouche microfluidique à la surface de la sensor chip. La fixation de l'analyte sur le ligand pour former un complexe constitue la phase d'association. La dissociation du complexe formé se fait dans un flux de tampon. L'enregistrement du signal de résonance en fonction du temps constitue un sensorgramme. Lorsque la dissociation est incomplète une étape de régénération de la surface de la sensor chip est nécessaire avant une nouvelle injection. Une sensor chip peut être utilisée plusieurs fois. Le nombre d'injections, qui peut varier entre 10 et 100, dépend de l'interaction étudiée et de la capacité du ligand immobilisé à conserver sa structure fonctionnelle après l'étape de régénération. |
| Terminologie
Biacore : |
le composé immobilisé est le ligand (il doit être purifié) |
| le composé en solution est l'analyte |
 |
Un
sensorgamme (Courtesy of Biacore, part of GE Healthcare) |
| Site Web de
la société Biacore http://www.biacore.com/lifesciences/index.html |
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| Généralités sur la technologie Biacore | |
| - | Rich RL, Myszka DG.
Survey of the year 2006 commercial optical biosensor literature. J Mol Recognit. 2007 20:300-66. Review. |
| - | Rich RL, Myszka DG.Survey
of the year 2005 commercial optical biosensor literature. J Mol Recognit. 2006 19:478-534. Review. |
| - | Rich RL, Myszka DG.
Higher-throughput, label-free, real-time molecular interaction analysis. Anal Biochem. 2007 361:1-6. Review |
| - | Homola J.Surface plasmon
resonance sensors for detection of chemical and biological species. Chem Rev. 2008 108:462-93 Review. |
| - | Karlsson
R, Katsamba PS, Nordin H, Pol E, Myszka DG. Analyzing a kinetic titration
series using affinity biosensors. Anal Biochem. 2006 Feb 1;349(1):136-47. Epub 2005 Oct 13. |
| - | Rich
RL, Myszka DG. Survey of the year 2005 commercial optical biosensor literature. J Mol Recognit. 2006 Nov-Dec;19(6):478-534. |
| - | Buijs
J, Franklin GC. SPR-MS in functional proteomics. Brief Funct Genomic Proteomic. 2005 May;4(1):39-47. Review. |
| - | Navratilova
I, Eisenstien E, Myszka DG. Measuring long association phases using Biacore. Anal Biochem. 2005 Sep 15;344(2):295-7. |
| - | Karlsson
R, Larsson A. Affinity measurement using surface plasmon resonance. Methods Mol Biol. 2004;248:389-415. |
| - | Karlsson
R. SPR for molecular interaction analysis: a review of emerging application
areas. J Mol Recognit. 2004 May-Jun;17(3):151-61. Review. |
| - | Katsamba
PS, Park S, Laird-Offringa IA. Kinetic studies of RNA-protein interactions
using surface plasmon resonance. Methods. 2002 Feb;26(2):95-104. Review. |
| - | Malmqvist
M. BIACORE: an affinity biosensor system for characterization of biomolecular
interactions. Biochem Soc Trans. 1999 Feb;27(2):335-40. Review. |
| - | Andersson
K, Hamalainen M, Malmqvist M. Identification and optimization of regeneration
conditions for affinity-based biosensor assays. A multivariate cocktail
approach. Anal Chem. 1999 Jul 1;71(13):2475-81 |
| - | Roos
H, Karlsson R, Nilshans H, Persson A. Thermodynamic analysis of protein
interactions with biosensor technology. J Mol Recognit. 1998 Winter;11(1-6):204-10. |
| - | Fivash
M, Towler EM, Fisher RJ. BIAcore for macromolecular interaction.Curr Opin
Biotechnol. 1998 Feb;9(1):97-101. Review |
| - | Lortat-Jacob
H, Ricard-Blum S. Use of surface plasmon resonance (BIAcoreTM) for the analysis of ligand-receptor interactions. In: Visualization of receptors: Methods in Light and Electron Microscopy G. Morel, ed CRC Press , Boca Raton (1997) pp 160-181. |
| - | Malmqvist
M, Karlsson R. Biomolecular interaction analysis: affinity biosensor technologies
for functional analysis of proteins. Curr Opin Chem Biol. 1997 Oct;1(3):378-83.
Review. |
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| Principales applications de la technologie Biacore |
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| Réactifs et consommables Biacore | |
Les
réactifs suivants sont indispensables à l'étude d'une
interaction et doivent être commandés à Biacore après
discussion du protocole avec Yannick Tauran. |
|
- |
Sensor
chips : il en existe différents types. Les sensor chips des deux
systèmes Biacore 3000 et Biacore T100 ne sont pas interchangeables |
- |
Kit
d'immobilisation |
- |
Kit
de maintenance |
- |
Détergent
P20 (à mettre obligatoirement dans les tampons à la concentration
de 0,005% pour le Biacore 3000 et de 0,05%¨pour le Biacore T100).
Le détergent n'empêche pas les interactions de s'établir
aux concentrations auxquelles il est utilisé |
 |
(Courtesy of Biacore, part
of GE Healthcare) |
 Sensor chip Biacore T100 Sensor chips Biacore 3000 |
| Catalogue des réactifs et consommables Biacore en format .pdf |
GE Healthcare
Europe GmbH |
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| Analytes susceptibles d'être analysés | |
| - | Molécules
: protéines, sucres, ADN, ARN, lipides |
| - | Milieux
biologiques complexes (lysats cellulaires ou bactériens, extraits
tissulaires, milieux de culture, liquides biologiques) |
| - | Cellules
entières, particules virales, bactéries |
| - | Petites
molécules (masse > 180 Da pour le Biacore 3000 et > 100 Da
pour le Biacore T100) |
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| Caractéristiques
des interactants nécessaires à l'établissement du
protocole d'étude d'une interaction |
|
| - | Masse
moléculaire |
| - | Point
isoélectrique (protéines) |
| - | Nombre
et positions des résidus de lysine et des résidus de cystéine
dans la séquence (protéines) |
| - | Présence
d'un tag (flag, c-myc, streptag, polyhistidine, biotine) à une
des extrémités de la protéine. Eviter la Glutathion
S-Transférase (GST). |
| - | Tampon
de dissolution des interactants (composition, pH) |
| - | Concentration
molaire des solutions disponibles d'interactants |
| - | Quantités
et volumes disponibles des solutions d'interactants |
| - | Degré
de pureté des interactants |
| - | Données
obtenues par d'autres méthodes d'étude sur l'interaction
étudiée (chromatographie d'affinité, immunoprécipitation,
essais en phase solide, pull down, pontage covalent par un agent chimique,
ultracentrifugation analytique, FRET - Fluorescence Energy Transfer) |
| <<<<<<<<< | |
| Publications 2007 (travaux réalisés avec l'appareil Biacore du plateau PAP) | |
| - | Dreux M, Boson B*,
Ricard-Blum S*, Molle J, Lavillette D, Bartosch B, Pécheur EI, Cosset
FL. The exchangeable apolipoprotein ApoC-I promotes membrane fusion of hepatitis C virus. J Biol Chem. 2007 282:32357-69. *These are equal contributions^ |
| - | Blanc G, Font B, Eichenberger
D, Moreau C, Ricard-Blum S, Hulmes DJ, Moali C.^ Insights into how CUB domains can exert specific functions while sharing a common fold: conserved and specific features of the CUB1 domain contribute to the molecular basis of procollagen C-proteinase enhancer-1 activity. J Biol Chem. 2007 282:16924-33. |
| Publications 2006 (travaux réalisés avec l'appareil Biacore du plateau PAP) | |
| - | Dreux
M, Pietschmann T, Granier C, Voisset C, Ricard-Blum S, Mangeot PE, Keck
Z, Foung S, Vu-Dac N, Dubuisson J, Bartenschlager R, Lavillette D, Cosset
FL. High density lipoprotein inhibits hepatitis C virus-neutralizing antibodies
by stimulating cell entry via activation of the scavenger receptor BI. J Biol Chem. 2006 Jul 7;281(27):18285-95 |
| - | Ricard-Blum
S, Beraud M, Raynal N, Farndale RW, Ruggiero F. Structural requirements
for heparin/heparan sulfate binding to type V collagen. J Biol Chem. 2006 Sep 1;281(35):25195-204. |
mise
à jour :27/02/2009 |